撰文 | 望夜
責編 | 兮
如果要盤點新冠疫情帶給生命科學領域的進展，mRNA疫苗正式獲批使用一定位列榜首。本次疫情中mRNA疫苗的開發可謂神速，自病毒序列公佈到FDA批准緊急授權使用（EUA）僅用時約11個月，凸顯其迅捷轉化潛力。目前大部分進展到臨床的mRNA應用聚焦於傳染病和癌症疫苗，這主要由於某些mRNA種類和劑型的固有免疫特徵，只需低劑量、低表達水平、局部遞送就足以起效。與此同時，mRNA編碼的蛋白或細胞免疫療法也已經起步，此類臨床應用要求mRNA僅可引起最小的免疫刺激、可在靶細胞或靶器官中大量表達、需要重複多次給藥，對其臨床轉化帶來新的生產和劑型挑戰。過去的一年見證了第二代新冠疫苗、Omicron加強針，及針對流感、EBV、HIV和癌症的mRNA疫苗的一系列臨床進展。
2022年5月9日，MIT的Daniel G. Anderson課題組在Nature Biotechnology發表題為The clinical progress of mRNA vaccines and immunotherapies的綜述文章，回顧mRNA療法的最新臨床進展，總結並展望這種mRNA藥物背後的轉化技術。BioArt特為讀者帶來文章的編譯。
隨著兩款mRNA疫苗獲批用於新冠病毒預防，mRNA的醫學前景已得到充分證明。兩款疫苗分別是輝瑞和BioNTech公司的BNT162b2（商品名Comirnity）及Moderna公司的mRNA-1273（商品名Spikevax）。其中後者在2020年3月16日就已開始接種志願者進行臨床試驗，彼時距離新冠病毒序列公佈日期僅過去數週。當然這些進展背後凝結的是此前長達十年的臨床試驗鋪墊。
使用mRNA編碼蛋白作為疫苗或蛋白替換的概念，早在1990年就已進行體內研究驗證【1】——經肌肉注射的mRNA在小鼠體內成功表達出目標蛋白。但是隨後經過近30年才得以開展臨床試驗，這種滯後部分源於mRNA穩定性、遞送的技術難題，還有研究熱度的冷卻，自2000年起，更多的資助和產業界興趣開始轉向DNA疫苗【2】。但是，仍有部分專家堅信，憑藉mRNA自身在設計和測試中的便捷性和快速實現、非遺傳免疫原性、可快速放大和大規模生產、幾乎可以忽略的插入突變風險等優勢，仍持續推動其研發。
mRNA獨特又重要的優勢在於可作為蛋白質翻譯模板。傳統疫苗往往依賴大規模哺乳動物細胞培養或使用大量雞胚，而mRNA一旦進入患者細胞就可以變為終產物，即，使用人體作為疫苗生成車間。此外，還有如下優勢：首先，允許人體對蛋白進行翻譯後修飾以降低潛在的免疫原性，但仍帶有完整功能。其次，多聚體蛋白在生物反應器中不易生產，但在患者細胞中可以正確地表達、摺疊和組裝，例如，Moderna設計過一個包含五種mRNA的CMV實驗性疫苗（mRNA-1647）可以直接產生五聚體蛋白。第三，mRNA療法可以產生跨膜蛋白或胞內蛋白，並將其運輸至特定的細胞內環境。
相較於病毒載體疫苗，mRNA更不易受預存抗體或給藥後抗體（針對病毒載體的抗體）的影響。儘管曾有臨床前研究觀察到針對RNA奈米載體的抗體產生，消除此類反應的方法也已出現，不會影響後續劑次的效價【3-5】。已有人體多次注射的成功案例【6】或多次注射帶有短干擾RNA奈米載體的成功案例【7】。
類似其他藥物，mRNA的劑量可以增減，不同劑次的間隔可長可短，取決於病人個體的需求、體重和疾病狀態。此外，由於mRNA自身半衰期短，引起不可逆副作用的可能性大為降低，因此可用於治療急性期疾病。由於mRNA的降解受正常細胞過程的調節，其在體內的半衰期可以通過添加相關修飾或以不同遞送方法進行調節。
本綜述中，作者廣泛介紹了有關mRNA藥物的臨床應用及進展，重點介紹在生產和劑型中的技術革新，因為這兩點決定了mRNA從概念變為獲批疫苗。此外，還重點介紹臨床實驗中的收穫及未來研究存在的挑戰，及其他藥物形式，如mRNA編碼的蛋白和細胞免疫療法。
一、mRNA作為一種醫療產品
mRNA藥物可以分成三類：預防性疫苗、治療性疫苗及蛋白編碼療法。儘管每種應用都有各自挑戰，但一個共同點在於如何將mRNA遞送到目的細胞並保持mRNA的穩定性。RNA分子原本就不穩定，所以早期概念驗證階段的重點就是提高穩定性。不同技術包括最佳化5’端帽子結構、3’端poly(A)尾的長度、及5’和3’非編碼區的調節元件等【8】。
還有遞送技術。十年間，研究者先後嘗試過裸mRNA、奈米顆粒包裹，如今更多使用脂質載體遞送。典型的脂質奈米載體（LNP）劑型包含如下組成：（1）一個可與多聚負電荷的RNA互作的陰離子或陽離子脂分子層；（2）一個輔助磷脂分子（如DSPC），用於模擬細胞膜中的脂質成分並支持形成雙層結構；（3）一種膽固醇類似物，用於調節脂雙層的流動性；（4）聚乙二醇-脂質，用於提高膠束穩定性並降低調理作用（圖1）。
圖1 mRNA脂質奈米顆粒的組成
儘管相較LNP的進展略顯滯後，多聚體奈米顆粒（PNP）也已顯示出作為遞送系統的前景。這種劑型通常由一個生物可降解的、含氨的多聚體組成，可以與RNA發生自組裝。根據應用不同，PNP中可加入輔助磷脂、膽固醇和PEG-脂。LNP和PNP都可進一步修飾特殊基團以增強其細胞靶向性。這類非病毒型的載體組成差別各異，對遞送效率的影響各不相同，也會影響細胞靶向性及免疫原性。
激發合適的免疫反應是劑型選擇中需要著重考慮的一環。RNA自身就是一個激活天然免疫的強效底物，無論作為RNA病毒的遺傳物質，還是DNA病毒複製過程中的副產物。微生物來源的RNA因其結構和序列特徵，可被宿主細胞的模式識別受體識別。主要有兩類模式識別受體通過與其匹配的天然免疫反應產生I型干擾素（IFN）和炎症細胞因子：一類是Toll樣受體（TLR），位於表皮細胞和DC、單核、巨噬等免疫細胞的細胞膜、內體和溶酶體；另一類是視黃酸誘導基因I（RIG-I）樣受體，位於大多數細胞的胞漿中。TLR3被雙鏈RNA（dsRNA）激活，而TLR7和TLR8則被單鏈RNA激活。RIG-I和黑色素瘤分化相關蛋白5（MDA5）分別被胞漿中5’磷酸化的短dsRNA（18-19bp）和長dsRNA（＞1000bp）激活【9】。TLR3激活導致IFN-I的產生，是通過TICAM-1通路；而其他TLRs利用MYD88依賴的級聯反應誘導轉錄因子NF-κB依賴或IRF3依賴的的炎性細胞因子前體的產生。上述通路被激活的程度，在一定程度上決定了一款mRNA產品的應用和發展前景。
mRNA的生物醫療應用場景仍在擴展。以下將從三方面討論——傳染病的預防性mRNA疫苗、癌症的治療性mRNA疫苗、由mRNA編碼的免疫療法。
二、 傳染病疫苗
mRNA作為疫苗的關鍵優勢在於其免疫激活能力和可作為免疫佐劑的能力，但成為一款真正在臨床使用的安全有效的產品，還要平衡免疫激活與目的抗原表達。到目前為止，最成功的產品都是非複製性mRNA疫苗，帶有化學修飾的或未修飾的核酸鹼基。目前獲批的兩款mRNA產品BNT162b2和mRNA-1273都帶有化學修飾的尿嘧啶。
而未修飾的mRNA新冠疫苗尚無成功案例。CureVac宣稱其未修飾新冠疫苗（CVnCOV）僅顯示47%的保護效果【10】，並將原因歸於流行毒株的變化；另有觀點認為CureVac所用劑量較低（12μg），而BNT162b2使用30μg，mRNA-1732使用100μg。選擇這樣的劑量是因為未修飾的RNA反應活性更高，但實際使用中可能不足以產生足夠的中和抗體；也有觀點認為未修飾的RNA翻譯效率低，導致表位少。
除上述非複製性mRNA疫苗，也有研究組在探索自我擴增型構建，其mRNA可編碼RNA依賴的RNA聚合酶，用於RNA擴增，因此可以增加抗原蛋白的表達【4】。目前該類疫苗僅完成早期臨床試驗。其需要遞送的mRNA分子量較大，可能是一個缺點。
與重組蛋白疫苗類似，上述mRNA疫苗不會產生感染性顆粒，因而不會像減毒疫苗和複製缺陷型病毒疫苗可能轉變為致病型，也不會引起疾病加重（如某款RSV減毒疫苗）。而較於DNA疫苗或某些病毒載體疫苗，mRNA也不存在由於整合到宿主基因組而引起的潛在插入突變風險。
2.1快速發現和開發
新冠疫情的全球快速傳播要求疫苗開發加速，mRNA疫苗的速度已經得到充分展現：當第一劑mRNA疫苗開始臨床測試時，病毒感染或接種DNA疫苗可以為非人靈長類中提供免疫保護效果的報道尚未發表。讓我們再次回顧一下本次史無前例的開發速度（圖2）——輝瑞-BioNTech和Moderna獨立而又幾乎同速完成疫苗開發進程，將一款疫苗的開發時間由之前的數年，縮短到如今約11個月（從基因序列公佈到獲得EUA）。
圖2 兩款mRNA新冠疫苗的開發時間
其他公司也正在加速推進各自管線。CureVac在2020年6月宣佈獲許開展CVnCOV的I期臨床試驗，並在一年後公佈其II/III期臨床的中期資料；Arcturus在2020年11月9號宣佈其I期臨床的中期結果；賽諾菲巴斯德、倫敦皇家學院、雲南Walvax也都在新冠序列公佈一年之內開啟各自mRNA疫苗的臨床試驗。
COVID-19大流行給傳統疫苗開發帶來挑戰，也為mRNA疫苗研究提供獨特環境。而來自生物醫學高級研究與發展局和流行病預防創新聯盟的巨量資助無疑也十分關鍵。公共衛生應急機制推動研究進入快速檔，並促進各大製造商找到縮短臨床前用時的方法，例如，平行推進開發過程中的不同環節，最小化模組研究，進行最小量的產品質量控制放行測試。而驗證mRNA疫苗技術與傳統疫苗優劣的大量研究則被置於較低的優先級。
2.2生產及放大
mRNA的一大優勢在於易於放大，類似某些DNA疫苗類型。因為全過程基本都在體外進行，使用化學方法。mRNA本身編碼目標抗原，無需活病毒，因此不需要特殊的生物安全車間；相較於利用雞胚生產的疫苗，mRNA疫苗無需受雞胚產能和逐一接種的限制。無細胞體系生產可將細菌汙染風險降至最低，且無需使用生物反應器。
全核酸疫苗，不論是mRNA或是DNA，均編碼免疫原，而其自身不依賴於該抗原。不同mRNA疫苗的生產使用相同的化學組分，這意味著一次投入，後續可用於不同病原的疫苗生產，這對突發病原或季節性疫苗的生產商尤其具有吸引力。此外，相同的生產過程不但可用於疫苗生成，也可用於mRNA藥物的生產，高效而靈活。鑑於新冠病毒變異株不斷出現，在第一代mRNA疫苗生產的同時，可以靈活地轉變mRNA序列但採用同樣的遞送載體。儘管目前對mRNA的生成成本說法不一，普遍認為其價效比高於傳統方法【11】。
2.3抗原特異的快速序列最佳化
mRNA技術的另一優勢在於序列的設計或再設計，即引入不同的核苷酸，這比蛋白或多肽的工程化改造更加直接。對新冠疫苗而言，最突出的例子就是通過在序列中引入脯氨酸使S蛋白維持在融合前構象從而穩定其免疫原性。
利用這一優勢，BioNTech公司開發出不少於5種mRNA候選疫苗（三種帶有核苷酸修飾，一種mRNA帶有尿嘧啶，及一種自擴增型mRNA）並推進到臨床階段，其中候選疫苗株BNT162b1使用帶有修飾核苷酸的mRNA編碼S蛋白的受體結合區，為增強免疫原性還引入一個T4纖維蛋白來源的三聚體摺疊結構域【12】；而最終選定的BNT162b2編碼全長S蛋白，並帶有兩個脯氨酸突變以將其鎖定在融合前構象【13】。其他諸如CureVac、Moderna、Translate Bio公司的mRNA新冠疫苗也都在S蛋白上引入不同的改造。
一些正在開發中的mRNA疫苗也都經過迭代最佳化，這是mRNA產品的又一大特徵。例如，靶向RSV的mRNA-1777已進行I期臨床試驗，通過一次注射後的中和抗體水平反映體液免疫反應【14】，但該藥物的開發進程因mRNA-1172而暫停，因為後者在動物水平顯示出更強效果【15】。類似的例子還有寨卡病毒候選疫苗株mRNA-1325的開發因mRNA-1893而暫停【15】，後者序列不同，在非人靈長動物試驗中有效性高20倍。截止2020年2月，已有90位受試者接種mRNA-1893或安慰劑，受試者包含血清陽性和陰性的，已接種第一針（一個月後接種第二針），測試劑量包括10、30、100 μg。
2.4編碼多種蛋白和/或蛋白亞基
新冠病毒S蛋白是一個同源三聚體，因此僅需引入單一mRNA序列。但某些病原的免疫原可能由多種亞基構成，不難想象使用重組蛋白方式的挑戰，需要構建各亞基併成功組裝成一個具有正確亞基數目的完整蛋白。而mRNA可以輕鬆應對這一困難，不同亞基或者通過一條長多肽鏈編碼或者分別使用不同mRNA鏈編碼。例如，CMV候選疫苗mRNA-1647包含6條mRNA，其中5條編碼5種不同的亞基共同構成五聚體蛋白，第六條編碼CMV的糖蛋白gB【15】。此外，還有利用一款疫苗應對兩種不同病原的策略，包含兩條mRNA鏈即可，如mRNA-1653就含有兩條mRNA鏈，分別靶向人類偏肺病毒（hMPV）和副流感病毒亞型3（PIV3）的F蛋白【15】。
2.5調節mRNA免疫原性
除通過序列迭代進行抗原的免疫原性最佳化，RNA產品生產過程中產生的固有免疫原性也可用於增強mRNA的免疫反應。這是RNA疫苗的一種優勢，因為可以激活免疫反應通路（如TLR系統），誘導DC成熟及後續的B、T細胞強免疫反應。當然，這種免疫激活作用也可能是有害的，導致嚴重的臨床副反應，例如，RNA依賴的蛋白激酶R（PKR）的活化就被認為會抑制翻譯【16】。
近年來，在體調節mRNA免疫原性已經取得一些進展，最主要的方法是用化學修飾替換非修飾核苷酸。某些核苷酸修飾，如假尿嘧啶和5’-甲基胞嘧啶，可以顯著降低TLR信號和PKR活化，增加蛋白在小鼠中的表達量【16-17】。前述兩種新冠mRNA疫苗都使用N1-甲基假尿嘧啶替換尿嘧啶。但也有研究顯示，相較於帶有修飾鹼基的mRNA，未修飾的構建在Hela細胞及小鼠肝臟中的蛋白表達量更高【18】。作者推測mRNA純化方法的改進和雜質RNA的去除或許可以部分解釋上述報道中的差異。使用凝膠柱純化祛除dsRNA或新近出現的更廉價的膜結合技術均可顯著提高翻譯效率【19-20】。CureVac的研究人員報道經HPLC純化、序列最佳化、含有非修飾鹼基的mRNA無免疫原性並可在小鼠體內表達更多的目的蛋白【21】。近期，Genetech的科學家報道白介素（IL）-1β和IL-1受體激動劑（IL-1RA）是調節mRNA系統響應的關鍵調節子【22】，這提示可能是小鼠、非人靈長類、人體中這類調節元素的差異導致研究結果不同。
2.6mRNA遞送的奈米制劑
早期，mRNA遞送使用的是裸mRNA或魚精蛋白，隨著技術進步轉向使用LNPs遞送。一款早期狂犬疫苗（CV7201）曾使用魚精蛋白，但免疫原性因接種方式不同存在差異（僅無針頭的皮下注射可以提供理想的免疫反應【23】），其開發中斷；轉而採用LNPs遞送候選疫苗株CV7202【24】。無獨有偶，採用裸mRNA的iHIVARNA-01是一款聯合TriMix（三種mRNA分別編碼TLR4、CD40配體和CD70）和HIV抗原的候選疫苗，曾在臨床測試過安全性和有效性，但由於缺乏免疫原性而中止。
目前進入臨床的mRNA藥物大多使用LNPs遞送。FDA批准的第一款基於RNA的寡核苷酸藥物patisiran（一段短的干擾RNA用於治療前白蛋白介導的遺傳性澱粉樣沉澱神經病（TTR））使用的就是LNP劑型，包含一種可電離脂質、d-Lin-MC3-DMA (MC3)、DSPC、膽固醇和PEG2000-DMG【25】。BioNTech的BNT162b2採用的是ALC-0315、ALC-0315、DSPC和膽固醇。目前看來，發現、測試和生產合適的劑型決定了mRNA產品進入臨床的速度。例如mRNA-1273使用mRNA-1647（CMV病毒疫苗）和mRNA-1653（hMPV-PIV2病毒疫苗）相同的LNP，其某些臨床和管理慣例已經建立好（表1）。
表1 曾/正進行臨床II/III期試驗的mRNA傳染病疫苗
LNP的組成對胞內遞送效率有重要影響，決定遞送的細胞特異性並調節其免疫原性。在各種脂質組成中，可電離脂質的作用尤其受到重視，因其在遞送中發揮多重功能，包括顆粒形成、細胞吸收和內吞體逃逸。可電離脂的結構差異巨大，為快速合成和評價，目前已建立起聯合的高通量方法，合成大容量的新脂質庫並評估其體內效果【26-29】。可用於在體遞送mRNA的可電離脂不斷湧現，可以兼顧遞送效率和耐受性【30-32】。儘管目前脂質的開發趨勢仍以引入可水解鍵（利於清除）為主，但可降解鍵可能會影響製劑的穩定性，仍然是LNPs製劑開發中的挑戰。凍幹似乎可以增加mRNA-LNPs的穩定性，但在低劑量應用場景（如疫苗）中，抗水解脂質可能更有優勢。
除全身系統遞送外，RNA製劑在其他疾病的治療中也有應用潛力，如神經系統【33】、眼部【34-35】，心臟【36-37】和肺部【38-41】。需要特別指出的是，基於可降解多聚物【39】、寡聚物【40】和脂質【41】的奈米制劑已可通過霧化方式促進肺上皮細胞遞送。例如，患有囊性纖維腫的患者已接受兩劑MRT5005，就是通過霧化方式給予的LNP包裹的編碼囊性纖維膜調節蛋白的mRNA。
2.7儲存和運輸
製劑開發的另一重要方面是儲存和運輸條件。在2014-2016年埃博拉疫情期間，維持疫苗的冷鏈運輸和儲存的重要性就已凸顯，彼時一款基於減毒重組VSV的實驗疫苗需要儲存在-80℃~-60℃，但在最需要疫苗的非洲地區往往難以保證。COVID-19席捲全球，從全球應急響應的角度，亟需將數以百萬劑的疫苗運輸到世界各地，地區間醫療基礎設施差別巨大，溫度條件也各不相同。據報道，CureVac的CVnCoV在5℃下可穩定保持至少3個月，即便在室溫下也可維持24小時。Moderna的mRNA-1273可在-20℃保存最多6個月，冰箱冷藏30天或室溫下12小時。BioNTech的疫苗最初需要保存在-70℃，其合作商輝瑞開發出一個特殊的乾冰運輸裝置，使其可在冰箱中保存2周【42】。
首次進行人體試驗時，通常僅有少量受試者和有限的測試點，採用的往往是非最優劑型，隨著臨床試驗的進展，保存條件也在最佳化。例如，Moderna的mRNA-1647在I期臨床中使用的是冷凍液體制劑，但在II期臨床時就改用凍幹劑型，可在冰箱中穩定保存18個月。
運輸、保存和穩定性的重要性在mRNA-1443的開發中體現得尤為突出，這款疫苗靶向CMV的磷酸蛋白65T抗原。它與mRNA-1647採用相同的臨床試驗測試，但臨床用材料在保存1年後未能達到內部規範，這款疫苗的測試似乎因此而中斷【43】。
將試劑製成乾粉是運輸和長期儲存中最常用的手段，但過程中的結晶和真空脫水可能影響製劑的穩定性，出現活性降低等情況。加入適當的冷凍保護劑，如海藻糖、蔗糖、甘露醇，據稱可以保持其穩定性。輝瑞已啟動旨在測試凍幹型BNT162b2穩定性和耐受性的III期臨床試驗。
2.8接種方式
何為最佳接種方式目前尚無定論，儘管批准的兩款新冠mRNA疫苗都採用肌肉注射。為在全球開展疫苗接種，最好採用無需對廣大醫護工作者再培訓的方式。BTN162b2、CVnCoV、ARCT-021及mRNA-1273都採取肌肉注射。倫敦皇家學院的研究者計劃研究吸入式自擴增mRNA疫苗，類似季節性流感疫苗【44】。吸入或滴鼻疫苗可以同時產生細胞和體液免疫，尤其適於呼吸道病毒預防，如新冠病毒。但滴鼻mRNA疫苗的研究受限於臨床前動物模型【45】，隨著LNP載體的繼續開發有望實現對上呼吸道特定靶細胞的高效遞送。
在更廣泛的mRNA賽道上，候選疫苗的接種方式既有皮下也有肌肉注射，也有疫苗在同一試驗中同時使用上述兩種方式。兩種接種方式產生的效果迥異，包括免疫原性和耐受性。mRNA-1440編碼H10N8亞型流感病毒血凝素（HA）蛋白，其I期臨床同時採用肌肉（25-400 μg）和皮下（25-50 μg）注射接種。皮下注射導致更多的接種點反應，甚至25μg劑量都無法繼續進行；而接受400μg劑量肌肉注射的三位受試者中的兩位出現嚴重的副反應（頭疼和紅斑），安全委員會因此中止該劑量的後續測試【15,46】。如前所述，狂犬疫苗CV7201僅在無針刺系統接種時才能產生免疫效果，也測試過皮下和肌肉接種兩種方式【23】。iHIVARNA-01似乎是目前唯一一款滴鼻給藥的疫苗【47】。類似蛋白和DNA疫苗，肌肉注射也是現階段傳染病mRNA疫苗最經常採用的接種方式。
2.9劑量方案
最理想的劑量方案是一次免疫後迅速產生100%的血清轉換，尤其在大流行期間。但由於存在免疫增強現象，大多數疫苗的免疫至少接種兩次，通常間隔數週，新冠mRNA亦如是：BNT162b2兩針間隔21天，CVnCOV和mRNA-1273的間隔為4周。BNT162b2和mRNA-1273的接種方案均已獲得EUA。由於一次免疫後即可產生部分保護效果，在疫情初期疫苗緊缺時，有人呼籲與其保證少數人的兩次接種不如在大範圍人群中僅接種一劑【48】，或者延長兩劑的間隔時間。80歲以上人群中的小範圍臨床資料顯示，BNT162b2兩劑間隔3個月的免疫效果優於間隔3周，評估指標是抗體產生峰值，但未涉及細胞免疫資料【49】。與此同時，越來越多的證據顯示接種第三針可產生更好的保護效果。最近資料顯示疫苗接種6個月後保護效果開始減弱【50】，而新變異株的出現又加劇了緊迫性。
自擴增型mRNA疫苗（如ARC-021和BNT162c2）設計的單劑免疫。劑量設計更加精細的研究也已出現，例如預防CMV的mRNA-1647在I期臨床試驗中，設置了30、90、180、300μg劑量（mRNA-1647或安慰劑），分別在0、2、6個月注射三次【15】。正在進行I期臨床的RSV疫苗mRNA-1345也設計三次免疫，分別間隔2個月，目前正以單次劑量進行臨床III期試驗。
儘管技術和抗原選擇類似，開發中的新冠病毒mRNA疫苗劑量範圍很廣。基於所用技術，自擴增型mRNA疫苗每一劑的用量較少：皇家學院的自擴增疫苗測試劑量介於0.1-1 μg。ARCT-021曾測試1-10 μg劑量，分別設計單劑或免疫-增強兩種方式，現已選定7.5μg用於後續開發。BNT162b2在30μg和mRNA-1273在100μg劑量下可以分別減少95%的新冠感染病例【51-53】。CVnCOV正在進行臨床III期測試，採用12μg劑量。新冠之外的賽道中，劑量使用範圍更廣，差異可達300倍，從1μg（CV7202）到300μg（mRNA-1653和mRNA-1657）【15】。目前看來，最有影響力的新冠或未來大流行病毒的疫苗未必是第一個獲得EUA授權的，更可能是第一個具備百萬劑產量並可有效分發到終端的疫苗。
2.10佐劑的作用
如前所述，mRNA具有固有的免疫激活特性。作為免疫激活的補充或替代，有研究組在疫苗中添加刺激分子，促進mRNA編碼抗原的免疫原性。例如，CureVac的CV8102是一段非編碼、不含帽子結構的單鏈RNA，混合一段陽離子多肽載體用於增強一款狂犬疫苗的免疫原性【54-55】。CureVac的RNAative疫苗技術平臺依賴雙組分mRNA疫苗，裸mRNA用於編碼抗原，另一個相同的mRNA混合魚精蛋白作為佐劑，激活TLR7和TLR8信號通路【56-57】。TLR信號通路的激活隨後活化DC，作為響應魚精蛋白複合物的天然免疫反應的一部分。另一款產品iHAVARNA-01同時含有激活DC的mRNA分子（編碼TriMix）及一條編碼HIV免疫原的mRNA【58】。
但mRNA疫苗很少添加佐劑。BNT162b2和mRNA-1273僅依賴mRNA-LNP製劑而不使用佐劑，目前正在開發mRNA的公司大多選擇無佐劑方法，這可能因為LNP組分本身即可刺激免疫系統中的某些組分，如IFN-γ（STING）通路刺激物和TLR-RIG-I樣受體非依賴媒介子。奈米制劑既可將mRNA遞送至特定靶細胞，又可根據設計選擇性刺激免疫系統，是mRNA作為疫苗平臺的一大優勢。
2.11副作用事件
由於是預防性製劑，傳染病疫苗的安全性和耐受性要求更高。在本綜述中討論的mRNA疫苗的安全性評估與蛋白類疫苗一致。局部注射疼痛、局部或系統性炎症反應（發熱、不適）是最經常出現的副反應【15、23、46】。兩款mRNA疫苗曾接種超過30萬健康志願者（包括老年人），是評估副反應譜的最佳資料庫，但在進行資料比較時應注意實際使用中存在三種不同劑量。此外，由於測試過程排除了某些最高風險的受試者（如曾有過敏史的），未必能代表全部人群。兩款疫苗的臨床III期試驗中，超過80%的受試者報告局部副反應，主要是疼痛。系統性事件主要是頭疼、疲勞、體溫升高、肌痛和關節痛【51】。對mRNA-1273，副作用的發生頻率和嚴重程度似乎在第二劑接種時最明顯【51】。尚不清楚mRNA和LNP對上述副作用起多大作用，因為在III期臨床中使用的安慰劑是鹽溶液，而非裸mRNA或空LNPs。第二劑疫苗接種後副作用嚴重程度增加可能源於反應原性增加，類似現象在mRNA-1647的臨床II期測試中也出現，這款CMV疫苗同時接種給CMV陽性和陰性的受試者，兩組受試者的安全性評估未見差異，但在第二次接種後出現副作用頻發和略微加重的趨勢。
即便像新冠mRNA疫苗這類大型臨床試驗，也未必能發現某些極罕見但又有潛在危害的副作用事件。疫苗接種數天至數週後，年輕男性中報告出現心肌炎也促使FDA的免疫接種諮詢委員會重新評估新冠疫苗的收益和風險。據計算，年輕男性人群患心肌炎的風險最高（每百萬劑接種中，12-29歲年齡組預計出現39-47次），但收益遠超風險（減少11000例感染，1139例重症及6例死亡）【60】。
三、癌症的治療性疫苗
近期，癌症免疫治療爆火，促使研究者將mRNA技術向該方向應用【61】（表2）。mRNA應用於癌症免疫治療的方法之一，是表達缺陷或改造的抑癌蛋白對免疫抑制的腫瘤微環境進行修飾。但目前的mRNA遞送形式不太可能覆蓋病人的所有癌細胞。事實上，更多的關注點是將mRNA作為治療性疫苗，訓練免疫系統發現並殺死癌細胞。mRNA疫苗成功對抗新冠和其他傳染病的關鍵特性也奠定其作為癌症疫苗的基礎，包括快速開發和生產，及可編碼完整抗原。此外，許多腫瘤病人已對現有免疫靶向藥物產生抗性，這也為mRNA產品提供新機遇。
表2 曾/正進行臨床II/III期試驗的mRNA癌症疫苗
無論何種方式的治療性癌症疫苗開發都面臨一系列挑戰。不同於預防性疫苗通過體液免疫實現保護性效果，治療性腫瘤疫苗必須確保產生強效的細胞毒CD8+細胞反應，以清除癌變細胞。儘管預防性腫瘤疫苗也是可行的，但目前FDA僅批准兩款預防性腫瘤相關疫苗，均由病毒（HPV和HBV）感染引起。選擇合適的抗原以產生腫瘤高特異性的免疫反應是另一大挑戰，因為不同個體中抗原差異巨大。為此，目前的趨勢是開發病人特異的新抗原。最後的挑戰來自腫瘤微環境的免疫抑制作用，阻止T細胞浸潤腫瘤並導致T細胞耗竭。因此，治療性癌症疫苗需要與克服腫瘤微環境的療法聯用，如免疫檢查點抑制劑（如前述BNT111）【62】。
3.1腫瘤相關抗原（TAA）
TAA選擇性表達在腫瘤細胞表面，是免疫系統殺傷腫瘤細胞的靶標。靶向TAA的癌症疫苗涉及一系列固定的TAA用以應對不同腫瘤。該類疫苗進度最快的是BNT111，包含四種黑色素瘤相關抗原（NY-ESO-1、酪氨酸酶、MAGE A3、TPTE），正在進行臨床I-II期試驗，測試單用或聯用免疫檢查點抑制劑的效果。這款疫苗通過靜脈注射接種，首先連續注射8次，隨後每月追加一次注射，目前與cemiplimab聯用的方案已進展至II期臨床。BNT111臨床試驗免疫的部分結果已經發表【6】：編碼四種TAA的mRNA需要進行最佳化以促進在非成熟DC細胞中的翻譯，每條序列都帶有一段信號肽、破傷風毒素的CD4+表位P2和P16、及MHC I類分子運輸結構域，用於增強HLA呈遞和免疫激活。50位受試者中的75%至少表現出對一種TAA的IFN-γ響應。抗原特異性T細胞表型為OD1+CCR7−DD27+/−D45RA−效應記憶型，刺激後分泌IFN-γ和腫瘤壞死因子。在持續接受疫苗接種的患者中，TAA特異細胞保持穩定；而停用維持接種的患者，T細胞仍可存在數月，隨後開始下降。對黑色素瘤的殺傷能力是通過離體測試的，向健康供者的CD8+細胞轉染TAA特異性T細胞受體，評估其裂解黑色素瘤的能力。每一劑接種後，病人血清中IFN-α、IFN-γ、IL-6及其他細胞因子的水平升高，接種數小時後達到峰值，24小時恢復正常。副作用事件同期出現，主要是輕度到中度的流感樣症狀，都是瞬時且自限的。最初評價的42位病人經影像學評估效果喜人：在僅接受該療法的25位患者中，3位出現部分響應，7位出現穩定響應；而在疫苗-抗PD1聯合治療組的17位患者中，6位出現部分響應。最有意思的結果出現在兩位經抗PD1療法失敗的患者，接受疫苗療法後又出現對抗PD1療法的響應，這與觀察到的疫苗誘導產生PD1+ T細胞相一致。BNT111目前正在進行黑色素瘤II期臨床試驗【63】。
mRNA-5671（V941）是一款多聯體，用於向免疫系統展示KRAS抗原，包括四種最常見的KRAS替代物（G12D、G12V、G13D、G12C）【15】，目前正在進行I期臨床試驗，測試單用或與pembrolizumab聯用。此外，還有BNT112（編碼5種前列腺癌特異抗原）、BNT113（編碼HPV16來源的腫瘤抗原E6和E7，即病毒的原癌蛋白）、BNT114（編碼多種選定的乳腺癌抗原）及BNT115（編碼三種卵巢癌TAA）。
CureVac使用未修飾mRNA鏈編碼TAA並已開展早期試驗，包括使用自體擴增的腫瘤裸mRNA作為免疫療法方案【64】，裸mRNA編碼6種腎癌相關抗原【65】，魚精蛋白穩定的mRNA編碼6種不同的黑色素瘤相關抗原【66】。上述研究主要考察設計的安全性和耐受性。其他涉及腫瘤相關抗原的研究還包括：CV9103（編碼四種前列腺癌抗原）【67】、CV9104（6條mRNA分別編碼6種不同的前列腺抗原）【68】、CV9201（編碼5種非小細胞肺癌抗原）【69】。但上述項目似乎都已中止【24】，僅CV9202尚處於活躍狀態，採用6條mRNA鏈分別編碼六種抗原（NY-ESO-1、MAGE C1、MAGE C2、TPBG（5T4）、生存素及黏蛋白-1）【70】。
3.2個性化抗原
在癌變過程中，惡性細胞突變後會表達一些正常細胞中不存在的蛋白。這些蛋白被蛋白酶體處理成多肽後遞呈到細胞表面結合MHC I類受體，並被T細胞受體所識別。這些新抗原通常是病人特異的，這就為腫瘤特異和病人特異的免疫療法帶來機遇和挑戰。
為獲得病人特異新抗原的mRNA疫苗，腫瘤被切除並利用二代測序鑑定出其中病人特異的新抗原。編碼這些新抗原的mRNA隨後被注射回該病人體內，以誘導免疫反應攻擊病人腫瘤。要儘量縮短操作時間，以使病人在癌變進展前獲得治療，整個週期據稱可縮短至30-40天【71】。這也給生產環節提出新的挑戰，因為必須滿足人用研究產品的技術指標。
目前，個性化新抗原疫苗大多是多肽疫苗而非mRNA疫苗，而且很難成功。最適宜接種此種療法的是那些突變種類最高的腫瘤，但這類腫瘤也最易產生耐藥性。與多肽疫苗相比，作者推測mRNA編碼的新抗原疫苗或許可以提供更強的免疫反應和臨床收益，因其具備更適宜的免疫刺激。mRNA可以編碼整個抗原蛋白，遞呈多種表位，而無需受限於多肽疫苗中特定的HLA表位【72】。此外，mRNA可同時表達多種抗原，用多條mRNA鏈或集中在同一條鏈。某些腫瘤類型會產生數十種新抗原，從誘發更廣泛免疫反應的角度，也應當表達多種表位以喚醒T細胞反應。
BioNTech已開發出多款臨床新抗原候選疫苗株用於腫瘤治療：經腹股溝淋巴結反覆接種，BNT121已在13位病人中測試對轉移性黑色素瘤的效果【73】。研究結果令人振奮，可產生足夠強的免疫反應並獲得某些臨床活性證據。BNT122包含多達20種個性化的新抗原，採用靜脈滴注，正在進行四項研究（表2）。初步結果顯示，BNT122單用或與PD-L1抗體ztezolizumab聯用時，安全性處於可接受範圍，副作用大都是短期的，如滴注相關反應和/或細胞因子釋放綜合徵（發熱、體寒）。此外，BNT122還在進行前列腺癌的I期臨床試驗，即將開展對非小細胞肺癌的試驗，以及一項尚未公開的輔助治療。
另一款個性化癌症疫苗mRNA-4157包含34種新抗原，由同一條mRNA鏈編碼（新抗原多聯體），通過LNP遞送，肌肉注射。該藥物正在進行I期臨床試驗，包括對切除後原發固體腫瘤的單一治療及對轉移性未切除腫瘤的治療。截止2020年2月，共有71位患者至少接種過一劑mRNA-4157【15】。最常出現的副作用是疲勞、接種處疼痛、結腸炎和肌痛。同時，mRNA-4157還作為pembrolizumab的輔助用於治療高風險黑色素瘤，正在進行II期臨床試驗【15】。
藉助患者特異的mRNA序列的快速應用，mRNA-LNP平臺的靈活和速度優勢在新抗原疫苗中得以體現。此外，多種接種方式（如瘤內注射、淋巴節注射、靜脈滴注、肌肉注射）都值得嘗試，同種LNP製劑可採用不止一種接種方式。這使得一種候選疫苗的應用潛力更廣：直接瘤內注射不可行或注射部位不靠近淋巴節時，可以選擇靜脈或肌肉注射相應mRNA疫苗。挑戰在於發現最有效的蛋白或蛋白組合，促使免疫系統攻擊癌細胞，促進免疫系統深入到腫瘤組織內部，併為每一位患者設計個性化的療法。
四、蛋白和細胞療法中的應用
最近，mRNA的應用研究領域重燃對免疫蛋白或免疫調節蛋白（如抗體或細胞因子）療法的興趣（圖3）。與傳染病和癌症疫苗相比，這類應用場景要求的蛋白表達量更高，某些甚至需要終生治療。
表3 曾/正進行臨床II/III期試驗的mRNA蛋白替代療法
蛋白免疫療法的另一挑戰是遞送，將mRNA送至靶器官或特定細胞類型以達到最佳治療效果。例如，某些蛋白需要額外的翻譯後修飾，如糖基化和蛋白裂解過程，以獲得完整功能。但是，翻譯後修飾往往是組織特異性的，可能無法由mRNA序列本身直接實現，凸顯出組織特異性遞送的必要性。
當mRNA與LNPs系統給藥時，多數選擇歸巢至肝臟，這是由於LNP表面結合的載脂蛋白E導致受體依賴的幹細胞吸收。非肝臟器官選擇可通過對脂質組分的修飾實現，包括調整脂質比例和一致性，產生靶向非內皮或腎臟的LNP。最近，LNP表面化學修飾PEG-脂結構使其可以靶向造血幹細胞處的骨髓內皮細胞【73】。
故，mRNA蛋白免疫療法面臨遞送、表現效率和耐受性等幾大挑戰，這或許是該應用方向進度滯後的原因。
4.1mRNA編碼的單克隆抗體療法
如何將mRNA經注射直接遞送至特定組織或器官是開發的主要障礙，系統給藥可以大大簡化臨床應用，只要過程是安全的且產生足夠量的蛋白獲得治療效果。編碼單克隆抗體（mAb）就是mRNA的應用之一，如mRNA-1944編碼一種病人體內分離到的基孔肯雅病毒中和抗體【74】。健康志願者中的初步結果顯示，在各個劑量（靜脈注射0.1、0.3、0.6 mg/kg）下均可檢出中和抗體表達。但在最高劑量時，4位受試者中的3位出現注射處反應，其中一位患者出現三級心動過速和白細胞升高，二級噁心、嘔吐、發熱和動態心電圖T波倒置【75】。另一個隊列使用相同的劑量，並預先使用類固醇類，未出現三級副反應事件，但抗體水平降低1.7倍【76】。0.3mg/kg劑量接種兩次（間隔兩週）的隊列資料顯示，第二次接種後副作用未加重且無脂質聚積【76】。
使用mRNA生產抗體一直受到研究的關注，一些工業合作正在進行中，如CureVac與Genmab的合作（mRNA編碼抗體用於抗癌療法），Neurimmune和Ethris的合作（吸入式mRNA編碼新冠單抗），這是基於生產等量的抗體使用mRNA編碼的價效比高於傳統重組方法的判斷。最具前景的方法應當是一個有關劑量、作用時間、PTM類型、遞送系統和目標抗體的相對治療指數的函數。
4.2mRNA編碼免疫刺激蛋白用於癌症治療
編碼具有直接治療效果的蛋白是mRNA抗癌療法的另一種選擇，如OX40配體（OX40L）或者白介素，可激活免疫系統。mRNA-2416就是此類產品，其mRNA編碼免疫檢查點調節子OX40L，經瘤內注射給藥。最初單獨使用時，41位患者的資料未能達到實體瘤療效評價指標，現在與durvalumab聯用治療卵巢癌，正在進行II期臨床試驗。
還有一些mRNA產品編碼數種不同的免疫調節蛋白，如ECI-006，包含TriMix（編碼DC活化分子CD40L、CD70、caTLR4）及編碼黑色素瘤特異TAA（酪氨酸酶、gp100、MAGE A3、MAGE C2、PRAME）的mRNA【77】。目前正在I期臨床試驗，治療切除後的黑色素瘤【78】。另一個例子是mRNA-2752，三條mRNA分別編碼OX40L、IL-23和IL-36γ，目前正在進行劑量測試，治療實體瘤和淋巴瘤。此外還有BNT131，編碼IL-12sc、IL-15sushi、IFN-α和GM-CSF，正在測試瘤內注射是否可以改變腫瘤微環境【71】。
另一類產品表達免疫調節融合蛋白，如MEDI1191，編碼一個單鏈融合蛋白，包含IL-12α和IL-12β亞基，兩者由linker連接，採用瘤內注射以提高耐受性【15】。
4.3mRNA在過繼免疫療法中的應用
過繼細胞轉輸是一種相對新穎的治療方法，涉及收集病人自身免疫細胞治療自身腫瘤。該方法已在乳腺癌患者中試驗過，通過向瘤內注射轉化有編碼嵌合抗原受體（CAR）的mRNA的T細胞，耐受性良好，可在腫瘤組織內誘導產生炎症反應【79】。4位患者接受自身T細胞治療間皮瘤，其中電轉入編碼鼠源單抗CAR的mRNA【80】。其中一位受試者在第三次輸入後數分鐘內出現過敏反應和心臟驟停，作者將其歸因於人體中IgE的產生。更近期，轉化編碼靶向間皮素CAR的mRNA的T細胞已用於治療前列腺癌，其臨床I期研究中未出現細胞因子釋放綜合徵，也未出現神經系統症狀。
CAR-T細胞曾通過逆轉錄病毒基因轉移產生，並取得實質性進展。近期引入CRISRP-Cas9介導的基因整合系統，而使用mRNA和核蛋白介導遞送的成功案例也已出現。正如前面討論的，需要關注CAR T細胞在體內產生的潛力。儘管核蛋白的體內功能性遞送尚未報道，最終mRNA應比病毒遞送更具優勢，表現在裝載能力、反覆給藥、安全性、有效遞送等多方面。
奈米制劑有利於促進在體遞送至多種類型的免疫細胞，包括巨噬細胞、B細胞、T細胞，因此在多種免疫療法中極具前景。例如，通過靶向T細胞的mRNA遞送，可以實現在體的CAR T細胞生成，從而為癌症治療創造出新的療法類型【81】。對LNP修飾特定脂結構，可使其重定向T細胞。而且，抗體靶向的mRNA奈米顆粒可以獲得免疫細胞特定受體的親和力，如CD4【82】。
mRNA可以提供（基因組編輯）核酸酶或鹼基編輯器的瞬時表達，用於免疫細胞的在體編輯，隨著RNA的降解表達很快終止。儘管到目前為止，mRNA僅在體外實現對T細胞中綠色熒光蛋白信號的破壞【83】，通過系統性遞送mRNA對肝細胞進行基因編輯，已在人體中用於治療TTR澱粉樣變性，其mRNA編碼的是Cas9蛋白，與一條靶向TTR的gRNA一起由LNP遞送。病人血液中的TTR蛋白濃度出現劑量依賴的降低，僅出現輕微的副作用，這一積極結果顯示出mRNA在系統性基因編輯中的應用潛力。
五、
結論和展望
mRNA在基因療法和蛋白療法間開闢出一個獨特的位置，具有多種優勢，同時也面臨諸多挑戰。相較於多聚體蛋白的生物反應器生產中難以克服的技術問題，通過一條或多條mRNA可在病人體內自行產生目的蛋白，其靈活性已經在CMV疫苗、癌症疫苗開發中初露崢嶸。當前，新冠病毒突變株不斷湧現，對疫苗設計靈活的需求更加迫切。隨著技術的發展，mRNA的未來應用不會僅限於傳染病和癌症治療。
mRNA療法表達的目標蛋白持續時間短，特別適於應用在僅需表達一種或少數幾種蛋白的場景，如傳染病疫苗。通過反覆給藥、調整劑量和間隔時間，可使其應用於病人的個性化治療。從安全性的角度看，在兩款疫苗（mRNA-1273和mRNA-1647）測試中，曾出現較為明顯的副作用，尤其在第二劑注射後。癌症疫苗BNT111已經在病人中使用，需要注射8次以上，療效十分穩定。吸入式mRNA療法MRT5005連續五週給藥，安全性並未隨著注射次數增加而變嚴重。
隨著工程化改造的人工蛋白的構建，mRNA療法的潛力還將進一步擴展。在蛋白療法中，可通過工程化改造（如融合Fc結構域）延長半衰期。mRNA療法也可借鑑類似策略。或許在未來胞內療法實現時，結果會更令人振奮。mRNA瞬時表達基因編輯器似乎可以減輕持續性表達產生的副作用。此外，胞內表達的抗體、抗體片段或蛋白結合基序可以提供一種嶄新的治療策略，如通過結合亞細胞定位結構域定位至核內，以提高編碼蛋白的效果。
mRNA的最初應用涉及免疫系統的刺激，無論是傳染病疫苗還是癌症疫苗。傳染病疫苗已邁出成功第一步，癌症疫苗方向尚無特別成功的案例，但BNT111的初步結果提示，通過結合高蛋白表達量和免疫激活通路可以克服早期蛋白疫苗遇到的某些技術瓶頸。
RNA自身固有的免疫激活能力使其應用更具優勢，且不依賴於編碼序列，例如CV8102就是作為佐劑的非編碼RNA，其免疫刺激特徵的確定是在回顧mRNA候選藥物臨床安全性和耐受性中發現的。mRNA類藥物最頻繁出現的副反應是炎症反應，如肌肉或皮下注射中的局部反應（局部疼痛、紅腫、痠痛），而靜脈、肌肉或吸入式接種更經常出現發熱綜合徵或流感樣症狀。上述症狀可通過抗炎藥物進行治療，如前述mRNA編碼基孔肯雅單抗的試驗中，預先使用類固醇可有效緩解副作用。該方法成功緩解副作用，但也帶來蛋白表達量降低的問題。
上面的例子為mRNA的未來應用提出新的思路：類固醇類是否可有效消除炎症副反應且是必需的？如果是，代價是否是蛋白表達量降低？更進一步，低蛋白表達量帶來副反應減少的現象是否暗示一定水平的炎症反應是理想蛋白表達量的前提？若果真如此，臨床試驗中就應該允許出現一定程度的炎症反應以保證足夠的目標蛋白產量，但又不至於威脅到重複給藥時個體的承受能力。
但多數mRNA產品使用的並非裸mRNA，而是包裹於LNP或PNP中，它們均會影響耐受性，這使問題更加複雜化。有研究者提出應在臨床中使用空LNP作對照，評估mRNA和LNP對耐受性的貢獻率。但當不含mRNA時，空LNP的理化特徵會改變，參考價值存疑。儘管在單劑疫苗注射或致病性疾病治療中瞬時的炎症反應是可以接受的，但在需要長期治療的應用中，尤其靜脈滴注時，應儘可能選擇耐受性好、安全的脂質和劑型。動物實驗在此過程中參考價值十分有限：癌症疫苗BNT111在人體中引起的細胞因子釋放比小鼠中低1000倍以上【6】，而吸入式MRT5005引起的發熱症狀在動物毒性實驗中未曾出現。
此外，脂質聚積也是一個長期存在的問題。如果產生的蛋白半衰期短，劑次間隔會很短，導致脂質來不及清除，在目標組織內部或其他組織中聚積，其長期風險無法預測。因此，未來的mRNA療法研究中，製劑科學的重要性等同於mRNA生物學研究。
mRNA療法非凡的潛力還在於不同的給藥途徑：肌肉注射、皮內注射、皮下注射、淋巴節內注射、瘤內注射、靜脈滴注、心內注射、吸入式。此外，還可探索其他給藥方式，如滴鼻、眼內或鼻內液滴、皮膚軟膏、栓劑、膀胱灌注裝置、顱內注射。作者認為mRNA療法將受益於遞送奈米顆粒，越來越多的證據顯示LNP和PNP可經工程化改造遞送至特定體內組織，包括肝臟、內皮、肺部、骨髓、免疫系統。遞送效率和組織靶向性的提高、更多可遞送目標的出現，無疑會促進mRNA療法的進一步發展。
兩款新冠疫苗的成功獲批凸顯出mRNA在臨床轉化中的速度優勢。得益於初期在個性化新抗原的快速發現和轉化中的探索，新冠序列公佈數週內mRNA疫苗就進展至臨床試驗。而新冠疫苗的應用又暴露出對冷鏈運輸儲存的依賴。-80℃冰箱是專業化設備，很難普及；而某些需要患者自己注射的療法，甚至-20℃儲存都難以保證。這再次說明，製劑科學是保證mRNA由試驗檯到臨床的關鍵。
本次新冠疫情中，mRNA疫苗的成功引起全世界的關注，無論其mRNA-LNP的優勢還是劣勢。當公眾仍聚焦在兩款疫苗的生產速度、儲存條件、副作用時，科研和醫學界的目光早已越過它們，熱切期待更多應用場景的實現。
原文連結：
https://www.nature.com/articles/s41587-022-01294-2
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